新型表观遗传编辑工具：赋能基因沉默，精准、可逆、开箱即用
项目简介
EpiEditor™是一款基于CRISPRoff系统开发的表观遗传编辑工具，通过定向修饰DNA甲基化，在不改变DNA序列的前提下，实现对基因表达的沉默，表观修饰还可被擦除或重置，且可“无创”调控基因，避免基因组损伤风险。表观生物联合微光基因推出了三种时效不同的工具套装，可根据实验目的进行选择合适的编辑工具：
产品信息
图1. Epi™ Editor-Fast原理示意图
产品介绍
Epi™ Editor-Fast 瞬抑器
Epi™ Editor-Fast通过dCas与优选Repressor结构域，实现基因转录抑制。在sgRNA的引导下，可精确结合到目标基因的增强子、启动子或编码序列区域。并通过组蛋白甲基化修饰，对转录复合体结合、RNA聚合酶延伸等形成物理阻碍，抑制或下调转录过程。
技术优势
1、精准性：
仅作用于DNA水平，不改变基因组序列，且对非编码区、编码区等传统方法难以定位的复杂遗传位点均适用。
2、可逆性：
通过抑制转录起始而非RNA降解，沉默效果更强。且通常在14天内可恢复基因表达，不留下遗传印记。
3、适用性：
可针对mRNA、microRNA等不同类型基因，脱靶风险低于RNAi技术。常用于复杂遗传位点功能解析、疾病模型构建及基因调控通路研究。
实测数据
图2. Epi™ Editor-Fast和Epi™ Editor-long有效抑制内源基因CD151表达
如上图所示，Epi™ Editor-Fast可在短期内（0-14天）达到与CRISPRoff（长效抑制器）相当的抑制效率，有效抑制内源基因表达，而不留下遗传印记。
图3. 原理示意图
稳抑器和恒抑器
Epi™ Editor-Long和Epi™ Editor-Mt优选CpG Methyltranferase和Repressor结构域，实现DNA和组蛋白的双重表观遗传修饰，介导基因的长期或短期沉默。Epi™ Editor通过sgRNA的引导，可精准定位到基因调控元件（如启动子、增强子），在不改变DNA序列的情况下，通过DNA和组蛋白的甲基化修饰，阻止转录转录因子、RNA聚合酶等结合，抑制或下调基因转录。
技术优势
1、精准性：仅作用于DNA水平，对非编码区等传统方法难以定位的复杂遗传位点均适用。
2、可逆性：甲基化修饰可被特定酶逆转，实现基因表达的动态调控。
3、安全性：不涉及DNA序列改变，减少脱靶效应和遗传风险。
4、持久性：甲基化修饰可在体外或体内长久保持，适用于慢性疾病治疗。
5、应用广：常用于复杂遗传位点功能解析、疾病模型构建、基因调控通路研究、药物研发及疾病治疗等。
图4. Epi™ Editor-Mte有效抑制c-Myc表达
Epi™ Editor-Mte 稳抑器
Epi™ Editor-Mte的DNA甲基化修饰范围更窄（＜300bp），且根据位点的不同，同样可以形成长期或短期沉默，适合增强子、启动子功能区域的精细研究。
● g10为Promoter区域靶点，254rev、332forw、427forw、579rev为Enhancer区域CTCF位点靶点；
● 用Epi™ Editor-Mte转染SNU-182、Hep3B2.1-7或HepG2；
● HCC细胞系代表三种主要HCC肿瘤亚型中的两种，S1和S2，它们与HCC患者更具侵袭性的表型和更高的早期复发风险相关。在这些细胞系中，c-MYC的敲低与体外和体内活力的丧失有关；
〇 S1亚型的特征是TGF-β异常激活WNT信号通路，导致MYC过表达（SNU-182）；
〇 S2亚型的特征是增殖基因特征以及MYC和AKT的激活（Hep3B和HepG2）；
● Epi™ Editor-Mte靶点无论在Promoter区域或Enhancer区域，均能有效抑制所有肝癌细胞系的c-MYC表达。
Epi™ Editor-long 恒抑器
Epi™ Editor-long的DNA甲基化修饰范围更宽（＞500bp），相较于Epi™ Editor-Mte可以形成更稳定的长期基因沉默，除了适合增强子、启动子功能区域的精细研究，同时也适合药物研发、疾病治疗及体内应用等。
图5. Epi™ Editor-long长久且有效抑制内源基因CD151表达（以上两图）
图6. 靶点区域DNA甲基化检测
● 由图A中DNA甲基化位点检测分析可知，在同一个靶点位置Epi™ Editor-Mte与Epi™ Editor-long酶活相当。
● 如图B所示，黑色方框内距离靶点更远的区域，Epi™ Editor-Mte在CpG位点DNA甲基化频率逐渐下降。与Epi™ Editor-long（＞500bp左右）相比，Epi™ Editor-Mte的DNA甲基化范围更窄（＜300bp）。
Epi™ Editor-Mte与Epi™ Editor-long在修饰范围上的区别：