ac4C修饰免疫沉淀试剂盒：Epi™ ac4C Immunoprecipitation Kit
项目简介
N4位乙酰胞嘧啶（N4-acetylcytidine，ac4C）是真核原核生物中保守的化学修饰，早期研究认为ac4C主要存在tRNA和18S rRNA上。而近些年研究表明，mRNA上也存在大量的ac4C，该修饰在促进蛋白翻译，影响RNA稳定性和可变剪接，调控基因表达发挥重要作用。
Epi™ ac4C Immunoprecipitation Kit使用优化的ac4C抗体-磁珠定向偶联策略，可高效捕获ac4C修饰片段，有效降低非特异性结合。通过免疫沉淀富集样本内的ac4C修饰片段后，作为模版通过acRIP-qPCR定量分析ac4C修饰水平。另外也可以制备文库进行转录组测序，绘制ac4C修饰图谱。
注：需建库测序请另购表观生物 “微量长RNA建库试剂盒”
试剂盒信息
产品优势
1. 高特异性富集，显著降低非特异性背景
2. 灵活衔接建库试剂盒，绘制ac4C修饰图谱
3. 已产出多篇高分acRIP-seq客户文章
实验流程
NGS实测数据
客户文章
1.Eur Heart J：乙酰化转移酶NAT10通过mRNA ac4C修饰调控血管重构（DOI: 10.1093/eurheartj/ehae707，中科院一区/IF：35.6）
研究内容：探讨了NAT10）介导的mRNA ac4C修饰在血管重塑中的作用机制。研究团队通过构建VSMC特异性NAT10敲除小鼠，结合体内外血管损伤模型，运用RNA测序、acRIP-seq和RIP-seq等技术，系统分析NAT10在VSMC表型转换和血管重塑中的调控网络。
研究结果：研究发现NAT10和ac4C修饰在人类及啮齿动物损伤血管中显著上调，NAT10通过直接结合并催化ITGB1和Col1a2等关键基因的mRNA发生ac4C修饰，提高这些mRNA的稳定性，激活下游FAK信号通路，从而促进VSMC从收缩型向增殖型表型转换，导致血管重塑。NAT10抑制剂Remodelin能够有效预防和治疗损伤诱导的新内膜形成，为血管重塑相关疾病提供了新的治疗靶点。
图1. 文章通过表观生物ac4C修饰免疫沉淀试剂盒富集ac4C修饰片段，随后通过acRIP-seq鉴定NAT10调控的ac4C靶基因，使用acRIP-qPCR分析NAT10敲除显著降低ITGB1和Col1a2 mRNA的ac4C修饰水平
图2. GlycoRNA isoform来源占比饼图
2.Cell Res：NAT10的赖氨酸2-羟基异丁酰化通过ac4C修饰促进癌症转移（DOI: 10.1038/s41422-023-00793-4，中科院一区/IF：25.9）
研究内容：通过对20对食管鳞状细胞癌原发肿瘤和转移肿瘤组织进行系统性蛋白质组学和赖氨酸2-羟基异丁酰化（Khib）修饰组学分析，结合CRISPR/Cas9功能筛选，发现NAT10蛋白的K823位点Khib修饰在癌症转移中发挥关键作用。研究进一步探讨了KAT7和SIRT7分别作为该修饰的"写入酶"和"擦除酶"的调控机制，以及USP39去泛素化酶如何通过与Khib修饰的NAT10结合来增强其蛋白稳定性。
研究结果：研究发现NAT10 K823位点的Khib修饰能够增强其与去泛素化酶USP39的相互作用，从而提高NAT10蛋白稳定性，进而促进NOTCH3 mRNA的ac4C修饰，增加NOTCH3 mRNA稳定性并促进癌症转移。研究团队还通过虚拟筛选发现了小分子化合物#7586-3507，该化合物能够特异性抑制NAT10的Khib修饰，在动物模型中显示出良好的抗转移效果。
图2. 文章通过表观生物ac4C修饰免疫沉淀试剂盒免疫沉淀ac4C片段后，通过acRIP-seq比较NAT10过表达细胞和对照细胞中的ac4C修饰谱，识别NAT10调控的ac4C修饰靶点；通过acRIP-qPCR用于验证NOTCH3 mRNA上的ac4C修饰水平在不同实验条件下的变化
图3. 文章通过表观生物ac4C修饰免疫沉淀试剂盒免疫沉淀ac4C片段后，进行了acRIP-seq测序
3.Nat Commun：NAT10依赖的N4-乙酰胞苷修饰调控PAN RNA稳定性、KSHV再激活及IFI16相关炎症小体激活（DOI: 10.1038/s41467-023-42135-3，中科院一区/IF：15.7）
研究内容：探讨了NAT10介导的ac4C修饰在卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）复制中的作用机制。研究团队通过acRIP-seq和RIP-seq技术在全基因组水平上分析了KSHV转录本的ac4C修饰位点，重点关注病毒长链非编码RNA PAN的ac4C修饰对病毒裂解性复制的调控作用，并探讨了这一修饰如何影响宿主先天免疫反应中IFI16介导的炎症小体激活。
研究结果：研究发现NAT10催化的ac4C修饰显著增强了KSHV PAN RNA的稳定性，促进病毒从潜伏期向裂解期的转换和病毒颗粒产生。敲除NAT10或突变PAN RNA上的ac4C位点均能显著抑制病毒复制。研究揭示了一个新的病毒-宿主相互作用机制：经过ac4C修饰的PAN RNA能够协助NAT10识别并修饰宿主IFI16 mRNA，增强其稳定性和翻译效率，从而激活先天免疫炎症小体反应。