BD单细胞测序平台采用微孔法进行捕获，将单细胞悬液和条形码磁珠加载到蜂窝状微孔板中，大部分微孔容纳“1细胞+1磁珠”进行配对。细胞裂解，磁珠捕获mRNA，回收磁珠后合成cDNA。经PCR扩增后构建文库，即可上机测序

分析条目：

标准分析

高级分析

个性化分析（评估收费）

分析示例：

1. Mol Cancer：Ex vivo modelling of human colorectal cancer liver metastasis by normothermic machine perfusion【1】

这项研究将常温机械灌注技术应用于6例CRLM患者的切除/移植肝脏标本，建立了一种新型离体肿瘤模型，证明该模型能在体外长时间（约41小时，最长144小时）保持肿瘤组织活力、保留肿瘤表型特征及微环境结构。研究还发现，肿瘤相关髓系细胞在灌注期间持续存在，受TME局部信号驱动，与患者不良预后显著相关。

研究方法：对灌注前（T0）和灌注后（T1）的肿瘤及癌旁组织进行连续取样，综合运用单细胞RNA测序、空间转录组、多重免疫荧光、流式细胞术及高分辨率呼吸测定等多组学技术，从细胞组成、转录组特征、空间分布和功能通路等多个维度全面评估模型的保真性。

BD单细胞转录组的应用：对6例患者的肿瘤和癌旁组织、两个时间点（T0/T1）共获得75,075个高质量细胞。应用思路上，首先构建细胞图谱鉴定14种细胞类型，再通过iCMS分型和InferCNV验证肿瘤细胞特征，然后利用通路推断和差异基因分析解析微环境功能，最后通过T0与T1的纵向对比追踪灌注对细胞状态的动态影响，并结合RNA velocity分析髓系细胞分化轨迹，最终通过配体-受体通讯分析和TCGA生存验证，揭示肿瘤相关髓系细胞的持续存在机制及其临床意义。

2. Nat Immunol：PD-1 receptor deficiency enhances CD30+ Treg cell function in melanoma【2】

Treg细胞缺失PD-1后，不会功能减弱，反而通过代偿性上调CD30等共抑制受体增强免疫抑制功能，在肿瘤微环境中促进肿瘤生长。机制上，PD-1缺失增强STAT5磷酸化，进而转录激活CD30表达。在黑色素瘤患者中，抗PD-1治疗后Treg中CD30显著上调，且与多种癌症不良预后相关。

研究方法：使用Treg特异性PD-1条件敲除小鼠、B16黑色素瘤模型、过继转移实验验证体内功能；流式细胞术、RT-qPCR、磷酸化STAT5检测及ChIP-seq数据挖掘解析分子机制；抗CD30L抗体阻断实验验证通路功能；人类患者PBMC体外实验及公开数据集分析完成临床转化验证。

单细胞测序样本设置与应用思路

• 鼠源TIL：取荷瘤第14天WT与 Pd1⁻/⁻ 小鼠肿瘤浸润淋巴细胞，BD scRNA-seq建库，通过差异基因分析发现CD30上调，结合GSEA、CellChat通讯分析及Monocle2拟时序分析，鉴定PD-1缺陷Treg的5种分化状态及TNF信号主导的新通讯模式。

• 人源PBMC：纳入健康对照与IV期黑色素瘤患者，BD scRNA-seq联合AbSeq蛋白检测，结合公开GEO数据集比较抗PD-1治疗应答者与非应答者Treg中CD30表达差异。

• CosMx空间转录组：在组织切片层面可视化Treg亚群空间分布及细胞互作，与scRNA-seq结果形成空间层面交叉验证。