华大单细胞转录组 | 4通道灵活上样,更低成本解析细胞异质性
单细胞转录组测序
单细胞转录组测序是在单个细胞水平上对转录组进行高通量测序分析的一项技术,本质是对极微量核酸进行测序检测。
基于华大智造DNBelab C-TaiM4单细胞液滴生成仪的转录组测序服务,该设备基于液滴微流控原理,用于细胞的分选和标记,建库测序成本低,助力肿瘤、干细胞、发育等方向疾病机制研究、细胞特异性分析,发现标志物,开发药物等研究。
技术原理
DNBelab C-TaiM 4 基于Drop-seq的液滴捕获原理,将带有Cell Barcode的凝胶微珠(大磁珠)、带有oligo测序标签的凝胶微珠(小磁珠)和单个细胞包裹在同一个“油包水”液滴中。然后在液滴中将细胞裂解,单个细胞释放出的mRNA被大磁珠微珠的oligo-dT捕获,同时与小磁珠测序接头结合,随后在液滴中共同进行进行逆转录反应,破乳回收cDNA中间产物和Oligo产物后分别进行cDNA文库和Oligo文库的构建,最后上机测序,进行数据分析[1]。
技术优势
1. 配备独立4通道微流控通路,可灵活完成1~4个样本的细胞分离、标记
2. 细胞捕获率高,适用于较多样本类型
3. 建库测序成本性价比高,有效数据更多
送样要求
细胞或组织样本,具体要求请详询
样本类型
仅限人和大小鼠
样本物种
分析内容
标准分析
1、原始数据质控与低质量细胞过滤
2、线粒体比例、基因数及UMI数质控评估
3、多样本整合与批次效应校正
4、降维聚类与细胞异质性分析
5、细胞群比例统计与样本分布分析
6、Marker基因识别与表达特征分析
7、基于Marker和参考数据库的细胞类型注释
8、不同细胞亚群及实验组间差异表达分析
9、细胞状态打分与功能状态评估
高级分析
1、细胞轨迹推断与拟时序分析
2、转录因子活性与调控网络分析
3、细胞通讯与配体受体互作分析
4、差异基因 GO/KEGG 功能富集分析
5、特定细胞亚群功能特征挖掘分析
个性化分析(评估收费)
1、多组学联合整合分析
2、特定通路、目标基因与机制定制研究
结果示例
图1. Barcode Rank 统计图
图2. 细胞聚类分析图
图3. 细胞类型注释
cr:华大官网
研究案例
Cell Metabolism:单细胞测序助力揭示动脉粥样硬化外泌体导致血管性认知障碍新机制【2】
测序应用:3位动脉粥样硬化(AS)患者颈动脉斑块,进行单细胞核RNA-seq
图4. 泡沫细胞外泌体是AS外泌体主要细胞来源
这项研究通过DNBelab C系列单细胞核RNA测序技术揭示了AS斑块中的泡沫细胞分泌的外泌体,通过miR-101-3p-Nrf2轴远程调控微胶质细胞靶向脑内微胶质细胞,加剧缺血性白质损伤和血管性认知障碍(VCI)。研究还鉴定出血浆外泌体miR-101-3p可作为早期诊断标志物(AUC=0.72),并证实临床药物富马酸二甲酯(DMF)通过激活Nrf2通路改善白质损伤和认知功能。
参考文献
[1] Jovic D, Liang X, Zeng H, Lin L, Xu F, Luo Y. Single-cell RNA sequencing technologies and applications: A brief overview. Clin Transl Med. 2022;12(3):e694. doi:10.1002/ctm2.694
[2] Zhang H, Zhou LQ, Yang S, et al. The foam cell-derived exosomes exacerbate ischemic white matter injury via transmitting metabolic defects to microglia. Cell Metab. 2025;37(8):1636-1654.e10.